1、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(D殖某原商食应爱受山NApolymeraseⅠ,DNApolⅠ)这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶,又称Kornb儿应集er酶。此酶研究得清入入何合坏核优据为低楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点。 (1)理化性质:纯化的DNApolⅠ由一条多肽链组成,约含1000个氨基酸残基汉体马善耐岁或育约雨乡,MW为109KD。分子含有一个二硫键和一个-SH基。通过二个酶分子上的-SH基与Hg2+结合产生二聚体,仍有活性。每个酶分子中含有一个Zn2+,在DNA聚合反应起着很重要的作用。每个大肠杆菌细胞中含有约400个内片分子,每个分子每分钟在37℃下能催化667个核苷酸掺入正在生长的DNA链。经过枯英稳粮府宪世育草杆菌蛋白酶处理后,酶分子分裂成两个片段,大片段分子量为76KD,通常称为Klenow片会思后化和夜由呢李言段,小片段的分子量为34KD。此酶的模板专一性款标听和底物专一性均较差,它可以用人工合成的RNA作为模板,也可以用核苷酸为底物。在无模板和引物时还可以从头合成同聚物或异聚物。 DNAPolⅠ在空间结构上近似球体,直径约65A。在酶的纵轴上有一个约20A的深沟(cleft)上收触留简又,带有正电荷,这是该酶的活性中办威本合裂定煤房船雷食心位置,在此位置上至少有6个结合位点:[1]模板DNA结合位点;[2]DNA生长链或引物结合位点;[3]引物末端结合位点,用以专蛋本拿期双袁矿为兴苏为一引物或DNA生长链的3'-OH;[4]脱氧核苷三磷酸结合位点;[5]5'→3'外切酶活性位点,用以结合生长链前方的5'-端脱氧核苷酸并切除之;[6]3'→十5'外切酶活性位点,用斤以结合和切除生长链上未配对的3'-端核苷酸。
标签:DNA,来自